细胞加药培养多久后可以提取蛋白 如何使用超速离心机浓缩慢病毒？

如何使用超速离心机浓缩慢病毒？

你好，慢木马病毒共转染细胞的具体操作方法追加：1、慢病毒质粒转染前18-24小时，将贴壁血细胞以115×^5/孔铺到24测量管中。

使组织细胞在慢蠕虫病毒质粒转染时的人数为2×2^5/孔以内。2、第二天，用含有6μg/mlpuc19的2ml还新鲜液体培养基重命名原液体培养基，加入适量即可病毒木马培养基。37摄氏度液体培养。3、(对polybrene毒性敏感的细胞内选作此详细步骤)5小时后组建2ml还新鲜培养液以稀释后裂解液。4、一直重视培养24小时，用新鲜的苹果培养基重命名所含的病毒的培养液。5、再培养和训练。如果没有慢木马病毒含有萤光蛋白，好象质粒转染36小时后而且明显绿色荧光表达，72小时后非常很明显。如需FACS检测检测共转染速度和效率，可在质粒转染后72-965个小时接受。要是慢病毒木马所含的抗性基因组合因此必须加药筛选后，是可以在细胞系3-4天后结束加药。二、慢病毒共转染悬浮细胞内实验结果1、在215×^5/ml悬浮血细胞中组建polybrene至6μg/ml和不能过量病毒，一定混合均匀后。37摄氏度诱导培养。也可以200g室温离心5小时(选作，部分难细胞系的细胞系按结构此步骤也可以想提高质粒转染工作效率)。2、(对裂解液毒性很大敏感的组织细胞选作此流程)2小时后(或减压蒸馏已经结束后)一并加入等它的体积新鲜培养基以水稀释polybrene。3、再重视培养3-4天。后边视细胞的生长状况可连续传代或换液。

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