sirna干扰原理步骤 在RNAi实验中,GFP干扰组的作用是什么?
用绿色荧光蛋白(GFP)来反映RNA干扰(RNAi)载体的转染效率,从而研究RNAi载体的抑制作用。它最早是在植物研究中发现的,后来在线虫研究中更为深入。其研究成果于2006年获得诺贝尔奖(安德鲁·法尔和克雷格·梅洛)。简单的过程是,双链RNA分子被一类称为Dicer的酶切割成小RNA分子(~35nt),然后与几种蛋白质结合形成复合物。激活后,它们能特异性地结合到靶mRNA上进行降解。表观遗传学又称表观遗传学,是近年来研究的热点。与经典的遗传学研究不同,基因功能的研究是在不改变核苷酸序列的情况下进行的。简言之,研究从DNA到蛋白质过程中可逆的和遗传的变化。最典型的是DNA修饰和组蛋白修饰,因为这些不同的修饰会导致基因沉默或表达改变。RNAi可以看作是表观遗传学的一部分。RNAi是mRNA水平的调节,没有DNA序列的改变,有很多内源性RNAi,很多还在研究中。如你所知,我希望能有所帮助。参考文献来自维基百科。
在RNAi实验中,GFP干扰组的作用是什么?
RNAi是指由与靶基因同源的双链RNA诱导的特异性转录后基因沉默。
作用机制是dsRNA被特定核酸酶降解,产生小干扰RNA(siRNA)。这些siRNAs与同源靶RNA互补结合,通过特异酶降解靶RNA,抑制和下调基因表达。
当外源基因如RNA干扰编辑病毒基因、人工转移基因和转座子随机整合到宿主细胞基因组中并由宿主细胞转录时,通常会产生一些dsRNA。
什么是rnai干扰?其作用机制是什么?
可能是RNA与基因组DNA混合。这样,在进行PCR时,如果基因完全不表达,结果是DNA混合在一起,PCR就可以给出结果。但这条带不是来自RNA。这是DNA污染,干扰PCR结果。RNA可以被提取出来,然后用DNA酶处理,分解可能混入其中的DNA。合理设计底漆也可以避免。即使存在DNA混合,用这种方法设计的引物也只能扩增RNA,而不能扩增DNA。这就要求引物应该设计成能够穿过外显子连接。因为DNA中基因的外显子和内含子是分开的,而RNA中的内含子是被切断的,外显子是连在一起的。剩下的,如果你想去的话,是接近结果的
正义引物可以作为上游引物,反义引物可以作为下游引物,这是RNA干扰中常用的。这两个引物大部分是互补的。
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