引物长度多少合适 如何设计扩增基因全长的引物？

如何设计扩增基因全长的引物？

你应该使用嵌套PCR来做这个实验。无论是在反转录前提取RNA还是直接从DNA中提取基因，考虑到模板的复杂性，都应该使用巢式PCR。建议从靶基因的上下游设计一个外引物，然后根据靶基因的上下游设计一个内引物。外引物不在目的基因上，但可以在目的基因上下游100bp以内，利用引物设计可以找到最佳引物，提高首次PCR的成功率。第一个PCR产物用作第二个PCR的模板，因此如果产生了正确大小的P带，就可以确定它是您的目标带。由于两种特异性扩增和大小正确，总特异性极高。另外，在第二个PCR过程中，模板是第一个PCR的产物，并且成分单一。不管内部底漆有多差，都没有问题。这避免了“如果不能在CDs区域的两端设计底漆怎么办？”这就是问题所在。你明白吗？欢迎提问！

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