引物怎么自己设计呢 同源臂引物设计原则？
同源臂引物设计原则？
如何进行引物设计？
如果这对通用引物没有信号，则意味着这两个位置有SNP，导致没有扩增。可以参考几种方法。
1：你可能知道这种细菌的种类和属，所以去NCBI找到相关种类的16S序列，做序列比对，设计简并引物，扩增全长，然后测序。
2：你根本不了解物种。你可以在网上找到更多的入门知识。最好放大v3v4区或V4区。在放大了其中一些之后，你可以对它们进行排序和比较。一般来说，你可以确认属，然后按照1的方法。
3:如果部分序列可以通过方法2扩增，但全长引物未能扩增，则将获得的部分序列用作race。
4:以上所有操作均失败。第二代的DNA被提取和测序，基因组被直接测量（如果你认为成本太高，你可以减少数据量进行比较）。
如何设计扩增基因全长的引物？
您应该使用嵌套PCR来做这个实验。无论是在反转录前提取RNA还是直接从DNA中提取基因，考虑到模板的复杂性，都应该使用巢式PCR。建议从靶基因的上下游设计一个外引物，然后根据靶基因的上下游设计一个内引物。外引物不在目的基因上，但可以在目的基因上下游100bp以内，利用引物设计可以找到最佳引物，提高首次PCR的成功率。第一个PCR产物用作第二个PCR的模板，因此如果产生了正确大小的P带，就可以确定它是您的目标带。由于两种特异性扩增和大小正确，总特异性极高。另外，在第二个PCR过程中，模板是第一个PCR的产物，并且成分单一。不管内部底漆有多差，都没有问题。这避免了“如果不能在CDs区域的两端设计底漆怎么办？”这就是问题所在。你明白吗？欢迎提问！
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