pcr为什么要两种引物 巢式PCR中的引物怎么设计？

巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），其中两对PCR引物用于扩增一个完整的片段。第一对引物的扩增片段与普通PCR相似。第二对引物称为套式引物（因为它们在第一次PCR扩增中），并与第一次PCR产物结合，使第二次PCR扩增比第一次短。巢式PCR的优点是，如果在第一次扩增中产生了错误的片段，那么在第二次扩增中对错误片段进行引物配对和扩增的概率很低。因此，巢式PCR扩增具有很强的特异性。

巢式PCR中的引物怎么设计？

巢式PCR一般有两对引物，一对外引物和一对内引物。为方便起见，一般建议内引物直接根据靶序列设计引物（与普通PCR引物设计方法相同），外引物根据靶序列两端的序列设计引物，即上下游来回移动一些碱基来设计引物。内外引物的设计应包含重叠区，一般为10bp。如果手头只有目标序列，而且目标序列前后没有序列信息，可以用普通引物作为外引物，然后从序列内部设计一对内引物。原理与以前相同，也应该包含10个左右的碱基重叠区。这时，因为你的内引物PCR产物会少碱基序列，你可以设计第三对引物，这对引物是外引物和内引物的剪接序列，然后PCR，缺失的碱基会被人为添加。

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