hrp标记的二抗 做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少？

做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少？

一般根据抗体的特异性和亲和力。第一抗体的浓度范围比较大，从1:200到1:1000，需要多次测定。第二抗体的稀释比为1:5000～1:10000。

流式抗体与普通做WB抗体有哪些区别，如何选择？

谢谢。除了抗原抗体反应原理，似乎没有其他类似的地方。

流式细胞仪可以根据抗原或抗体对细胞进行计数。这是一个高成本的定量实验。并不是每个实验室或医院都能做到这一点，结果是定性或半定量的，准确性和敏感性一般。如果抗体不好或操作水平不好，就会出现很多杂带，不易分析。

做wb时，一抗和二抗浓度是怎么确定的？怎么设置抗体滴度？

第一抗体的量与样品中目标分子的含量有关。如果含量高，就不必用太多抗体，以免浪费，而且条带太亮，无法分析。建议使用厂家的抗体浓度（宜桥神州将提供抗体剂量和自然细胞系检测结果）。如果样品与制造商的细胞不同，您可以尝试上下探索一个或两个浓度梯度；

可以使用第二抗体的剂量和您实验室的常规剂量。如果效果不理想，可以根据阴性对照通过阳性试验检测第二抗体的效果，以及其他人使用的效果，看是否有问题。

WB孵二抗，孵错了,还能重孵吗? 本来是鼠抗孵成兔抗？

理论上，我还没试过。不管怎样，这是错误的。你不妨尝试一下，或者用条带缓冲液洗一下，再加一个新的

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