DNA连接酶和聚合酶的区别 外源性基因与载体的连接方式哪四种？

外源性基因与载体的连接方式哪四种？

第一个是t，a连接，现在常用的是t载体，一般PCR产物两端都加a，这样t，a匹配，T4连接酶就可以把它们连接在一起。二是黏稠酶消化位点连接，将载体与外源基因用同一酶消化（双酶消化，或单酶消化均可）回收相应片段，用黏稠端酶消化成第三、平端连接，也可用T4连接酶消化，但结扎效率很低。第四，同源重组，利用一个含有目的基因的载体a和另一个载体B共同转染（转化）宿主，可以通过同源重组产生含有目的基因的载体B。它主要用在病毒载体和重组载体上你用的是T4连接酶，对吗？对于平端连接，必须使用大量的目标碎片来竞争载体自连接。一般来说，碎片与载体的摩尔比必须大于8:1，以实现更高的连接效率。在10μL体系中，使用0.5μL T4连接酶。然后你以10:1的摩尔比加入你的碎片和载体，然后用水补充体积。另外，导致平端连接失效的主要原因是载体的自连接非常严重。可以用磷酸酶对载体进行处理，对载体进行去磷酸化，即去除载体末端的磷酸基团，这样可以大大降低载体的自连接概率，提高连接成功率。

DNA连接酶和聚合酶的区别 t4连接酶原理 连接酶的最适温度是多少

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