crispr cas9原理及应用 怎样用CRISPR实现基因敲入？

怎样用CRISPR实现基因敲入？

一般情况下，sgRNA用于引导cas9蛋白到达指定的敲入位置，切割原始基因组，并将其转移到靠近敲入位置的基因组序列的供体质粒中。质粒还包含需要敲入的外源序列。这样，在切割cas9蛋白的同时，通过同源重组将外源基因导入基因组。

转基因与基因敲除/敲进的区别？

转基因技术是利用现代生物技术，将目标基因，经过人工分离、重组，进入生物体基因组，从而改善生物体原有特性或赋予其新的优良特性。除了克隆外源基因和构建表达载体外，cripsr/cas9/piggbac/microinjection还可以实现遗传转化体系的建立、遗传转化子的筛选、遗传稳定性分析和回交育种。

基因敲除技术是通过同源重组将外源基因整合到靶细胞基因组的某一位点，以达到修饰染色体上某一基因的目的。它针对的是功能未知但序列已知的序列。它改变生物体的遗传基因，使特定基因的功能丧失功能，使部分功能受阻，进而影响生物体，进而推断基因的生物学功能

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