刚果红染色的意义 刚果红染色法的原理?
刚果红可以将纤维素染色成红色络合物,对纤维二糖和葡萄糖没有影响。它可以用来鉴别纤维素分解菌或纤维素分解菌。刚果红在培养基中能与纤维素形成红色络合物。纤维素酶分解纤维素时,不能形成刚果红与纤维素的络合物,培养基中会出现一个以纤维素分解菌为中心的透明圆环。纤维素分解菌可以通过是否产生透明圈来筛选。
刚果红染色法的原理?
常用的刚果红染色方法有两种:首先培养微生物,然后加入刚果红显色反应,用1mg/ml的Cr(刚果红,下同)溶液覆盖培养基,10-15min后,倒出Cr溶液,加入1mol/L的NaCl溶液,15min后,在产纤维素酶的菌落周围会出现一个透明的圆圈。(添加氯化钠的原因:刚果红是一种与培养基结合的多糖底物,但分解纤维素的细菌能产生纤维素酶,纤维素酶能将多糖底物分解成低聚糖。这样刚果红就不能被束缚,氯化钠可以洗去束缚不牢的刚果红,留下大小不同的透明圆圈。大透明圈对纤维素的分解能力强。)方法2:在倒盘时加入刚果红,制备质量浓度为10mg/MI的铬溶液。灭菌后,以200 mi的速率制备CR溶液。向培养基中加入1mI。按0:1:1的比例加入铬溶液,搅拌后倒入平板。当细菌在培养基上生长时,产生纤维素酶的菌落周围会有明显的透明圈。
什么是刚果红染色法?
刚果红(CR)可与多糖(如纤维素)形成红色络合物,但不与纤维素水解产生的纤维二糖和葡萄糖发生反应;刚果红与培养基中的纤维素发生反应,使整个培养基呈红色,而不是与细胞中的纤维素发生反应。细菌产生的纤维素酶在体外分泌,将菌落周围培养基中的纤维素分解,使菌落周围培养基的红色消失,从而形成一个明亮的圆环。
刚果红染色,为什么出现透明圈?
刚果红可以将纤维素染色成红色络合物,但对纤维二糖和葡萄糖没有影响。它可以用来鉴别纤维素分解菌或纤维素分解菌。
刚果红染色是检验什么?
常用的刚果红染色方法有两种,一种是培养微生物,然后加入刚果红进行显色反应,另一种是在倒盘时加入刚果红。
方法1:菌落形成培养基覆盖1mg/MI。10-15min后,除去CR溶液,加入的物质浓度为1mol/I,15min后倒出NaCl溶液,纤维素酶产生菌周围会出现一个透明的圆圈。
方法2:制备浓度为10 mg/MI。灭菌后,每200mi使用一次铬溶液。向培养基中加入1mI。按0:1:1的比例加入铬溶液,搅拌后倒入平板。当细菌在培养基上生长时,产生纤维素酶的菌落周围会有明显的透明圈。
刚果红两种染色方法的比较
刚果红用于纤维素分解菌的筛选已有20多年的历史,教材中给出了两种方法。方法一是传统方法,缺点是操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落混合;其优点是显色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法2的优点是操作简单,不存在混合菌落的问题。缺点是纤维素粉、琼脂和马铃薯汁中含有淀粉,会使产淀粉酶的微生物出现假阳性反应。然而,产淀粉酶微生物产生的透明圈是模糊的,这与纤维素酶产生的透明圈是有区别的,因为纤维素是培养基中的主要成分。方法2的另一个缺点是有些微生物具有降解色素的能力,它们在长期培养过程中会降解刚果红,形成一个清晰透明的圆环,很难与纤维素分解菌区分开来。
两种刚果红染色法有什么优缺点?
第一种方法是培养后染色,时间只有10~15分钟,不会影响结果。
第二种方法是在菌落培养前加入刚果红染料。如果不灭菌,培养过程中会有其他杂菌生长,影响实验结果。
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